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本NF-κB p65抗体是用人工合成的人NF-κB p65氨基端(N-terminal)的一段多肽进行适当修饰后免疫兔，然后用protein A和抗原多肽亲和柱经过两步纯化而得到的高纯度抗体。本NF-κB p65抗体仅识别p65，不识别RelB、C-Rel、p50和p52。配套提供了Western一抗稀释液，可以用于Western检测时的一抗稀释。

NF-κB是一种常见的转录因子，可以被炎症因子、生长因子或趋化因子等激活。常见的炎症因子(包括Interleukin-1β和TNF-α等)都可以激活NF-κB。NF-κB由两类亚基形成同源或异源二聚体。一类亚基包括p65(也称RelA)、RelB和C-Rel；另一类亚基包括p50和p52。最常见的NF-κB亚基组成形式为p65/p50或p65/p65。

NF-κB未被激活时和IκB-α形成一个复合物，分布在细胞浆中。在炎症因子、生长因子或趋化因子等可以激活NF-κB的刺激存在的情况下，IκB-α会在Ser32和Ser36被磷酸化，随后被泛素-蛋白酶体途径降解。NF-κB和IκB-α解聚后，其核定位序列被暴露，从而被转运到细胞核内促进NF-κB依赖的基因转录。通过免疫染色检测NF-κB的主要亚基p65是否被转移到细胞核内，就可以判断NF-κB是否被激活。或者提取细胞核蛋白通过Western检测细胞核内p65是否增加，也可以判断NF-κB是否被激活。

• 对于本抗体，Western检测时一抗要4℃缓慢摇动过夜，如果仅短时间与一抗孵育检测效果较差。
  
• 在Western实验后，请注意回收稀释的抗体。回收的抗体在进行Western实验时至少可以重复使用10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，4℃保存。
  
• 回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10000g离心1～3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。

• Western检测：
  
  • 按照1:500用百奥莱博提供的Western一抗稀释液稀释抗体。
    
  • 把经过封闭的蛋白膜与稀释好的一抗4℃缓慢摇动过夜，确保稀释的抗体至少能在摇动的瞬间覆盖蛋白膜。
    
  • 回收稀释的一抗，4℃保存以备下次继续使用。
    
  • 按照Western的实验步骤进行后续的洗涤、二抗孵育、洗涤和检测等操作。具体操作可以参考如下网页：
    Western实验步骤及试剂
• 免疫染色：
  可以使用百奥莱博的免疫染色一抗稀释液(货号：YT088)稀释抗体，使用后注意回收稀释好的一抗，具体操作可以参考如下网页：免疫染色的方法与步骤
  
• 其它实验操作请自行参考适当的protocol进行。